Hvorfor GAPDH bruges i Western Blot? + Eksempel

Hvorfor GAPDH bruges i Western Blot? + Eksempel
Anonim

Svar:

GAPDH bruges ofte som belastningskontrol.

Forklaring:

I Western blotting bruger vi ofte GAPDH som en belastningskontrol. Hvad dette betyder er, at ved at undersøge for GAPDH, kan vi kontrollere, at vi har en ladet tilsvarende mængder proteiner på forskellige baner i blottet.

Et eksempel på brug - siger vi har en sygdom, som vi mener, forårsager en forhøjelse af et bestemt protein i cellen. Vi ville lave en prøve fra "sunde" celler og en anden prøve fra "syge" celler. Vi ville derefter indlæse tilsvarende proteinmængder af begge prøver på en gel for Western blot.

Efter at have undersøgt blot for vores protein af interesse, finder vi det i de syge celler, at proteinniveauet faktisk er forhøjet (det er et mørkere bånd, der produceres på blottet). At bevise, at denne stigning i protein skyldes en forandring af ekspressionen i cellen, i stedet for en læsningsartefakt (det vil sige, jo mere direkte bånd er forårsaget af en ændring i proteinekspression i cellerne og ikke ved os ved et uheld at lægge mere af "sygdomsprøven" end den "sunde") vil vi også sonde blot for GAPDH for at vise, at de totale proteinniveauer er de samme i begge baner.

Derfor viser vi, at tilsvarende protein er blevet indlæst i de to baner, og at ændringen i båndintensitet vi observerer skyldes ændringer i proteinekspression for proteinet af interesse.