Hvad er chromatografi ionbytning? + Eksempel

Hvad er chromatografi ionbytning? + Eksempel
Anonim

Svar:

Det er en proces til adskillelse af forskellige proteiner baseret på deres ladnings- og bindingsegenskaber til et materiale.

Forklaring:

Ved forskellige pH-værdier bærer forskellige proteiner forskellige ladninger. Ved at placere en blanding af proteiner ved en indstillet pH kan du have en blanding, som indeholder proteiner med forskellige ladningsegenskaber.

Hvis denne blanding af proteiner hældes på en søjle, som indeholder et materiale med en ladning på det, vil søjlen binde proteiner inden for modsat ladning.

Du kan derefter bruge forskellige opløsninger indeholdende forskellige mængder ioner for at eluere (unstick) proteinerne fra søjlen.

For eksempel, siger du havde en blanding af proteiner, hvorfra du ønsker at rense et bestemt protein. Hvis du vidste, at din protein af interesse var positivt ladet ved en bestemt pH, kunne du hælde blandingen på en søjle, der indeholdt negativt ladet materiale.

Alle proteinerne, der ikke bragte en afgift, eller hvis negativt ladet ville strømme lige gennem søjlen. Du kan derefter frigive dit positivt ladede protein ved at oversvømme kolonnen med positive ioner, som ville fuldende den negative ladning på søjlen. Denne konkurrence vil så få dit protein af interesse at blive elueret.

Her er et eksempel på dette.

Hver bakke indeholder en buffer i en anden koncentration, og som det kan ses i 175 mM prøven (øverste venstre hjørne) har meget lille rødt / brun protein bundet til den ladede membran, da der har været konkurrence mellem ionerne i bufferen og protein for de ladede bindingssteder på membranen (ionerne i bufferen har "vundet", fordi der er flere af dem, og så har de forhindret proteinet i at binde). I prøven nederst til højre er meget protein bundet til membranen, fordi der er færre ioner til stede for at konkurrere om bindingssteder.

I denne video kan du se anionbytningskromatografi i drift: