Hvad gør primære antistoffer og sekundære antistoffer i ELISA-testen?

Hvad gør primære antistoffer og sekundære antistoffer i ELISA-testen?
Anonim

Svar:

Det afhænger af typen af ELISA-analyse.

Forklaring:

ELISA = Enzymbundet Immunosorbent Assay.

Der findes forskellige typer ELISA-analyser. Hvad du har brug for er:

  • antistof med et enzym bundet til det
  • antigen, hvortil antistoffet binder
  • substrat af enzymet, der forårsager en målbar reaktion

Det enzym knyttet til antistoffet er ofte HRP (peberrodperoxidase). HRP kan reagere med forskellige substrater, der enten ændrer farve eller udsender lys, både målbare.

Billedet viser et overblik over forskellige typer af ELISA assays. Jeg vil forklare, hvordan de fungerer nedenfor.

Direkte ELISA

En plade belægges med antigenet (Ag) og a primært antistof med enzym tilsættes. Når substratet tilsættes, vil reaktionen forekomme og er proportional med mængden af antistof-antigen-interaktioner.

Indirekte ELISA

Igen er en plade belagt med antigenet og a primært antistof binder til antigenet. EN sekundært antistof tilsættes, der binder til det første antistof. Det andet antistof indeholder enzymet, der reagerer med substratet.

Sandwich ELISA

Her er to eller tre antistoffer involveret. Et indfangningsantistof er bundet til plader og binder til antigenet. Dette følges af de samme trin som enten det direkte (eneste antistof) eller den indirekte metode (to antistoffer).

Konkurrencedygtige ELISA

Nogle gange kaldes hæmning ELISA, er lidt mere kompliceret. En plade belægges med det antigen, der skal undersøges. EN primært antistof med enzym inkuberes først med en prøve med en ukendt koncentration af det samme antigen. Dette tilsættes derefter til pladen, hvilket tillader antistofferne, som stadig er fri til at reagere med antigenet på pladen. Efter at antistof-antigenkomplekserne i prøven er vasket væk, tilsættes substratet.

Når den ukendte prøve har en masse antigen, vil der være mindre antistof fri til at binde til pladen = lavere signal.