Svar:
Western blot (proteinimmunoblot) er en udbredt analytisk teknik anvendt til at detektere specifikke proteiner i en prøve af vævshomogenat eller ekstrakt.
Forklaring:
Nøgleelementerne, der kræves for at udføre denne opgave, er:
- adskillelse af proteinblandinger efter størrelse ved anvendelse af gelelektroforese.
- den effektive overførsel af separerede proteiner til en fast bærer.
- den specifikke påvisning af et målprotein ved hjælp af omtrent matchede antistoffer.
Vestlige blots evne til klart at vise tilstedeværelsen af et specifikt protein, både ved størrelse og gennem bindingen af et antistof gør dem velegnede til evaluering af niveauer af proteinekspression i celler til overvågning af fraktioner under proteinrensning.
I mange tilfælde anvendes western blots i kombination med andre nøgleantistoffer baseret på detektionsteknikker, såsom ELISA eller immunhistokemi.
Hvad er en western blot HIV-test?
Det enzymbundne immunosorbentassay (ELISA), også kendt som et enzymimmunoassay (EIA). Serien af blodprøver udføres for at teste for hiv. Det enzymbundne immunosorbentassay (ELISA), også kendt som et enzymimmunoassay (EIA), er den første test, som din sundhedsplejeudbyder vil bestille til at skærmme mod hiv. ELISA, som Western blot-testen, registrerer HIV-antistoffer i dit blod.
Hvad er problemet, hvis båndene ikke vises i Western Blot?
Mange ... Der er mange grunde til, at bands måske ikke vises på en western blot. Har prøve- og antistofkombinationerne arbejdet tidligere? Nedenfor er kun nogle, som jeg kan tænke på i øjeblikket, der kan få båndene ikke til at fremstå: Har proteinet overført fra gelen? Prøv at farve membranen med noget som ponceau S eller amido sort for at se om båndene er til stede. Nogle gange kan du se proteinbåndene på membranen ved at væde det og holde det i en vinkel på lyset. Er det primære antistof arbejde? Dette er en svært at teste, og den
Hvorfor GAPDH bruges i Western Blot? + Eksempel
GAPDH bruges ofte som belastningskontrol. I Western blotting bruger vi ofte GAPDH som en belastningskontrol. Hvad dette betyder er, at ved at undersøge for GAPDH, kan vi kontrollere, at vi har en ladet tilsvarende mængder proteiner på forskellige baner i blottet. Et eksempel på brug - siger vi har en sygdom, som vi mener, forårsager en forhøjelse af et bestemt protein i cellen. Vi ville lave en prøve fra "sunde" celler og en anden prøve fra "syge" celler. Vi ville derefter indlæse tilsvarende proteinmængder af begge prøver på en gel for Western