Hvorfor er DNase og lysozym i lysetrin, der anvendes under proteinrensning?

Hvorfor er DNase og lysozym i lysetrin, der anvendes under proteinrensning?
Anonim

Svar:

At rense proteinfraktionen …

Forklaring:

Hvis du renser et (ofte specifikt) protein, bliver du nødt til at slippe af med så meget skrald, som du kan, der kan være bundet til dem.

Det afhænger i en grad af hvilket protein du er efter, men generelt er det en god ide, især i præparativ rensning for at slippe af med så mange urenheder som muligt.

1:

Da proteiner generelt er store og følgelig vil forekomme i de nedre bånd i din (ultracentrifugerede) fraktion, vil du slippe af med nogen nukleinsyrer, især hvis proteinet du er puryfying vedrører de slags Pol1, Omvendt transkriptase eller ethvert andet enzym involveret i replikation / transkription / oversættelse.

Du kan adskille de nukleinsyrer, der er til stede i prøven ved hjælp af en DNAse: dette vil fuldstændigt hydrolyse DNA i dets bestanddele.

Mind dig, der er forskellige DNAse'er, der alle er forskellige i deres mekanisme og specificitet for deres substrat. Afhængig af den anvendte DNAse kan den også vise endo- eller exo nukleaseaktivitet …

Mere til det punkt, RNAse er mere egnet, da RNA sædvanligvis er mere inden for opdræt / fraktion af proteiner og kan binde til proteinet.

2:

lysozym: Et enzym, der har mindst to funktioner:

Det deglycosylerer enzymer: De fleste proteiner, der bæres i blodbanen, er glycosylerede: de har få sukkermolekyler knyttet til dem. Lysozym vil fjerne sukkerresterne.

Det har også evnen til at nedbryde cellevæggen af Gram-Positive bakterier, hvilket forårsager dem lyse. (hvis du vil rense protein fra gram-positive bakterier)

Eventuelle nedbrudte produkter, enten nukleinsyre eller sukkerrester, vises i de øverste fraktioner af centrifugerøret på grund af deres "lettere" opdrift.